El presente proyecto se centra en la inactivación de bacterias con genes específicos mediante la tecnología CRISPR-Cas9 en matrices complejas. El creciente problema de la resistencia a los antibióticos y la necesidad de manipular comunidades microbianas en diversos entornos (como alimentos, el microbioma intestinal, o muestras ambientales) impulsan la exploración de métodos alternativos y específicos. La tecnología CRISPR-Cas9, un sistema de inmunidad adaptativa bacteriana descubierto recientemente, ofrece la potencialidad de editar o eliminar genes diana en bacterias con alta especificidad. Este proyecto se enfocará en diseñar, entregar y validar sistemas CRISPR-Cas9 dirigidos a bacterias seleccionadas en entornos con una riqueza bacteriana elevada, con el objetivo de incrementar el conocimiento sobre su aplicación en condiciones no controladas. Los resultados de esta investigación podrán servir de base para el desarrollo de una herramienta versátil para la investigación y posibles aplicaciones biotecnológicas.

• Leartiker

• Diseño y optimización de gRNAs específicos.
• Análisis bioinformáticos y secuenciación del genoma completo (WGS) de cepas relevantes.
• Evaluación de métodos de entrega del sistema CRISPR-Cas9 en bacterias, incluyendo shock térmico y otros enfoques.
• Construcción de plásmidos CRISPR funcionales.
• Ensayos in vitro y pruebas preliminares en matrices lácteas (leche pasteurizada y cruda).
• Análisis del impacto en la producción de enterotoxinas y valoración de la especificidad del sistema.